U937细胞高效率转染条件分享
一、转染材料准备
1. 转染试剂用量：10ul
2. DNA/siRNA浓度：电讯
3. 细胞密度：1*106-1*105
4. 转染用培养板：6孔板
5. 转染试剂：zeta life ,Advanced DNA RNA转染试剂；货号：AD600025
6. 转染时间：15小时
7. 细胞培养胎牛血清：Z7181FBS-500胎牛血清
8. 细胞冻存液：L0100无血清细胞冻存液
注意：本细胞转染用量条件不适合lipo使用
操作过程：
1.提前1天接种细胞：细胞汇合度在60-80%左右，再进行转染。
2. 核酸复合物制备：将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合，用移液器吹打、混匀，室温静止15分钟。
3.在细胞培养基中加入核酸复合物：根据参考用量在细胞中加入核酸复合物，并轻轻混匀；细胞培养基里面可以含有血清。
4.细胞换液：转染24小时后对细胞进行正常换液，悬浮细胞转染过程中不用换液。
5.分析结果：质粒DNA转染48-72小时后荧光检测转染效率，48-96小时检测mRNA或蛋白表达。若进行稳定表达细胞株的筛选，则在转染后24-48小时左右加入适量的药物进行筛选。siRNA转染后9小时荧光检测转染效率，48-72小时检测mRNA或蛋白表达。
