DiO细胞膜绿色荧光染料

产品编号：DiO-5、 DiO-10、DiO-25

规格：   5mg、10mg、25mg

储存条件: 4℃ 避光保存，保质期一年。配制的储存液-20℃ 避光保存，保质期六个月。 

外观：红棕色固体

溶解性：DiO 溶于无水乙醇、DMSO 和 DMF，在 DMSO 中的溶解度约为 10mg/ml。较难溶解时，可以适当加热或者超声处理。

λEx/λ Em(MeOH) = 484/501 nm

CAS 号：34215-57-1

分子式：C53 H85 ClN2 O6

分子量：882

产品介绍

DiO 即 DiOC18(3)，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现绿色荧光。DiO 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐染色整个细胞的细胞膜。DiO 在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强， 被激发后可以发出绿色荧光，具有很高的淬灭常数和激发态寿命，可以用标准的 FITC 滤光片检测。

DiO 作为示踪剂或长期示踪剂，被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织。DiO 通常不会显著影响细胞的生存力。

DiO 除了细胞膜荧光标记外，还可用于检测细胞的融合和粘附，发育或移植过程中的细胞迁移，通过 FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。

DiO 染色后可进行Paraformaldehyde（不可使用甲醇等其他试 剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用 0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。DiO 染色强度通常低于 DiI，有时在固定组织中会完全丧失。

使用方法

1. DiO细胞膜染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH 储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。

注意：未使用的储存液保存在-20 ^oC，避免反复冻融。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～

5 µM的工作液。

注意：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制。可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。  

2. 悬浮细胞染色

（1）悬浮细胞密度为 1 × 10⁶/mL加入到工作液中。

（2）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

（3）染色细胞试管在1000～1500转离心5分钟。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入预温37℃的培养液。

（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 粘壁细胞的染色

（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

（4）在37 ℃培养细胞 2～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

4. 流式细胞仪的检测

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。

仅供科学研究使用，禁止用于它用。

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