美国Biozellen®基质胶在细胞侵袭实验中的应用
一、应用
•3D细胞球体培养
•小鼠皮下成瘤
•细胞侵袭
•适合用于3D细胞药物筛检平台
•细胞生长和分化
•代谢/毒理学研究
二、试剂盒组分
B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10 | |||
货号. | Components | Amount | Content |
B-P-00002-A | A 基质胶 (2X) | 4、8、20 | 0.5mL / tube |
B-P-00002-C | C 缓冲溶液 (10X) | 1、2、1 | 1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT |
B-P-00002-D | D 缓冲溶液 (10X) | 1、2、1 | 1*10ml、2*10ml、1*50 mL / BT |
三、细胞侵袭实验准备程序
A、试剂准备:
1、C缓冲溶液 (0.5 X) 制备 : 使用37 ℃水浴回温的无血清细胞培养液 (例如: 无血清DMEM等，用于稀释A胶) 稀释C缓冲溶液 (10 X) (货号: B-P-00002-C)至C缓冲溶液 (0.5 X), 即体积稀释20倍。使用前放置37度水浴槽。 (例如:1 mL C缓冲溶液 (10 X) + 19 ml 无血清DMEM; 如未使用完毕，可保存于4 ℃ 冰箱, 保存一周)
2、A胶 (1X) 制备 : 将 A胶 (2X) (货号: B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回温10分钟，确认完全溶解。再将37 ℃水浴回温的无血清细胞培养液取 0.5 mL，加至37 ℃已溶解的 0.5 mL A胶 (2X)，配置成1 mL 的 A胶 (1X)。使用前置于37度，可降低A胶黏度。(单次使用，勿重复冷冻解冻 A胶 (1X) )
B、细胞侵袭实验步骤
1、准备适用24孔板的Transwell装置(例如:康宁Transwell insert, 8 μm PET membrane)。
2、用37 ℃已回温的C缓冲溶液 (0.5 X)将A胶 (1X) 原液体积稀释5-20倍，建议一开始可选用15倍。 (根据细胞种类做稀释比例对比实验，找出最适合自己实验体系的稀释倍数，稀释倍数越高，胶体越软，越容易穿透)
3、根据Transwell上室底部面积加入步骤2的 0.1 mL 稀释后的A胶稀释液到Transwell上室中。
4、将步骤4在 4 ℃ 冰箱孵育2-3小时。
5、在Transwell上室中加入0.1 mL 无血清的细胞悬液，使细胞最终浓度约7.5 x 104 cells/well.。
6、在Transwell下室中加入0.8 mL 含10 %血清的细胞培养液做为chemoattractant，吸引细胞进行迁移及分泌基质蛋白酶 (MMP) 侵袭。 (对照组为Transwell下室中加入含0.8ml无血清的细胞培养液)。
7、将细胞培养板在37 ℃, 5 % CO2培养箱孵育24-48 小时。
8、移除培养液，以PBS 清洗2次。
9、用棉签轻轻擦掉上层未迁移的细胞。
10、加入1 ml 100 % 甲醇室温固定30分钟,再以PBS 清洗2次。
11、加入 1 ml 0.1 % 结晶紫染液 ( 0.1 % (g/ml) PBS 结晶紫) 室温染色20 分钟，再以PBS 清洗2次。
12、将Transwell移至载玻片上，在显微镜下随机6-9个视野观察计算迁移的细胞数。
四、Biozellen®3D细胞培养基质胶套装
货号. B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10
规格 2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit
Storage 4℃保存、 保存两年
五、案例分享
A.形成3D肿瘤球体成功案例分享
B.Biozellen基质胶被溶解后分离的完整3D细胞结构照片
培养后的3D细胞球体， 在Biozellen基质胶被试剂盒里面的
D Buffer溶解分离后仍然可以得到完整的3D细胞结构
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